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安徽快三专家预测和值推荐:GFP融合蛋白免疫沉淀的新选择——GFP selector

作者:admin 信息来源:达科为 日期:20190613 打印 字体:  
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还在用传统方法进行GFP融合蛋白免疫沉淀?那你就是Outman了,来看看IBA Lifesciences的GFP selector,给您提供GFP融合蛋白免疫沉淀的新选择!

传统的GFP融合蛋白免疫沉淀是基于与GFP特异性抗体非共价链接的protein A或protein G结合在固相,从而拉下蛋白的原理(见图1 A),其产率和效率通常受限于一抗的特异性和固相上protein A/G的结合能力。通常,在用SDS缓冲液洗脱时,抗体发生变性并与GFP融合蛋白及相互作用的配体一起从树脂上分离下来。因此,洗脱液中通常含大量一抗重链和轻链见图1 B,妨碍鉴定蛋白的相互作用,还有可能影响下游实验,比如蛋白质印?;蛑势追治?。

GFP selector是一种新颖的高品质树脂,用于高效、可重复的GFP融合蛋白免疫沉淀。GFP selector含单域抗体(single-domain antibody,sdAb),可识别GFP及其衍生物,具有高特异性和pmol级亲和力。重要的是,GFP融合蛋白可以从GFP selector洗脱而不被抗体重链或轻链污染见图1 C,因此可以轻易地鉴定与GFP融合蛋白特异性结合的蛋白。

△图1

GFP selector与传统GFP免疫沉淀的比较:

  • 传统免疫沉淀法使用与protein A偶联的GFP特异性抗体,结合GFP蛋白;

  • 传统法在洗脱时,抗体轻链和重链与抗原一起从树脂中洗脱;

  • 由于GFP特异单域抗体与固相的共价稳定连接,结合的GFP融合蛋白从GFP selector被洗脱时不会有抗体重链或轻链污染。


GFP selector也能结合更高容量的GFP融合蛋白(每μl树脂结合>4μg GFP,见图2 A)。与竞争产品比较,只有GFP selector能够结合含GFP的HeLa裂解物中所有靶蛋白(见图3),因此,它明显优于竞争产品和传统基于protein G的方法。

△图2

GFP selector具有高容量和高特异性:

  • 将GFP Selector和竞争产品与饱和的重组GFP蛋白孵育,通过SDS-PAGE和考马斯染色分析1μl树脂的容量;

  • 将相同体积的GFP selector和竞争产品分别与不含任何GFP标记蛋白的HeLa裂解物一起孵育,洗涤后,产物通过SDS-PAGE分离并进行银染色分析。

注:与竞争产品相比,GFP selector背景信号弱

△图3

GFP selector与竞争产品的免疫沉淀结果:

  • 将等量GFP Selector和竞争产品与1ml含GFP标记蛋白的HeLa裂解物一起孵育,通过考马斯染色和蛋白印迹分析上样、洗涤产物、洗脱产物。

产品优势:

  • 高特异性:识别GFP,mEGFP,sfGFP,Emerald GFP及最常见的CFP和YFP变体,不与mCherry,mRFP,dsRed,mTagBFP及其衍生物发生交叉反应;

  • 高容量:每μl树脂结合>4μg GFP;

  • 应用:推荐用于免疫沉淀、质谱。

此外,IBA还提供其他融合标签免疫沉淀试剂盒:

产品名称

货号

规格

GFP Selector

2-9131-002

200μl  Slurry for 10 reactions

2-9131-005

500μl  Slurry  for  25 reactions

2-9131-020

2000μl  Slurry for 100 reactions

GFP Selector Kit

2-9132-008

1  Kit

RFP  Selector

2-9141-002

200μl  Slurry for 10 reactions

2-9141-005

500μl  Slurry  for  25 reactions

2-9141-020

2000μl  Slurry for 100 reactions

RFP Selector Kit

2-9142-008

1  Kit

TagFP  Selector

2-9151-002

200μl  Slurry for 10 reactions

2-9151-005

500μl  Slurry  for  25 reactions

2-9151-020

2000μl  Slurry for 100 reactions

TagFP  Selector Kit

2-9152-008

1  Kit

MBP  Selector

2-9111-002

200μl  Slurry for 10 reactions

2-9111-005

500μl  Slurry  for  25 reactions

2-9111-020

2000μl  Slurry for 100 reactions

MBP  Selector Kit

2-9112-008

1  Kit

GST  Selector

2-9121-002

200μl  Slurry for 10 reactions

2-9121-005

500μl  Slurry  for  25 reactions

2-9121-020

2000μl  Slurry for 100 reactions

GST  Selector Kit

2-9122-008

1  Kit


IBA lifesciences(德国):IBA公司总部位于德国。二十年来,IBA以杰出的专利技术Strep-tag?系统为基础,发展出完整的产品组合,涵盖重组蛋白表达、纯化与固定以及特定细胞从全血或相关体液中分离的技术。同时,IBA也是全球领先的核酸合成专家,在DNARNA寡核苷酸的合成上已有超过二十年的经验,能根据客户的选择,生产含有特定染料或化学修饰的特殊寡核苷酸。



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