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下载安徽快三开奖结果:GFP融合蛋白免疫沉淀的新選擇——GFP selector

作者:admin 信息來源:達科為 日期:20190613 打印 字體:  
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還在用傳統方法進行GFP融合蛋白免疫沉淀?那你就是Outman了,來看看IBA Lifesciences的GFP selector,給您提供GFP融合蛋白免疫沉淀的新選擇!

傳統的GFP融合蛋白免疫沉淀是基于與GFP特異性抗體非共價鏈接的protein A或protein G結合在固相,從而拉下蛋白的原理(見圖1 A),其產率和效率通常受限于一抗的特異性和固相上protein A/G的結合能力。通常,在用SDS緩沖液洗脫時,抗體發生變性并與GFP融合蛋白及相互作用的配體一起從樹脂上分離下來。因此,洗脫液中通常含大量一抗重鏈和輕鏈見圖1 B,妨礙鑒定蛋白的相互作用,還有可能影響下游實驗,比如蛋白質印?;蛑勢追治?。

GFP selector是一種新穎的高品質樹脂,用于高效、可重復的GFP融合蛋白免疫沉淀。GFP selector含單域抗體(single-domain antibody,sdAb),可識別GFP及其衍生物,具有高特異性和pmol級親和力。重要的是,GFP融合蛋白可以從GFP selector洗脫而不被抗體重鏈或輕鏈污染見圖1 C,因此可以輕易地鑒定與GFP融合蛋白特異性結合的蛋白。

△圖1

GFP selector與傳統GFP免疫沉淀的比較:

  • 傳統免疫沉淀法使用與protein A偶聯的GFP特異性抗體,結合GFP蛋白;

  • 傳統法在洗脫時,抗體輕鏈和重鏈與抗原一起從樹脂中洗脫;

  • 由于GFP特異單域抗體與固相的共價穩定連接,結合的GFP融合蛋白從GFP selector被洗脫時不會有抗體重鏈或輕鏈污染。


GFP selector也能結合更高容量的GFP融合蛋白(每μl樹脂結合>4μg GFP,見圖2 A)。與競爭產品比較,只有GFP selector能夠結合含GFP的HeLa裂解物中所有靶蛋白(見圖3),因此,它明顯優于競爭產品和傳統基于protein G的方法。

△圖2

GFP selector具有高容量和高特異性:

  • 將GFP Selector和競爭產品與飽和的重組GFP蛋白孵育,通過SDS-PAGE和考馬斯染色分析1μl樹脂的容量;

  • 將相同體積的GFP selector和競爭產品分別與不含任何GFP標記蛋白的HeLa裂解物一起孵育,洗滌后,產物通過SDS-PAGE分離并進行銀染色分析。

注:與競爭產品相比,GFP selector背景信號弱

△圖3

GFP selector與競爭產品的免疫沉淀結果:

  • 將等量GFP Selector和競爭產品與1ml含GFP標記蛋白的HeLa裂解物一起孵育,通過考馬斯染色和蛋白印跡分析上樣、洗滌產物、洗脫產物。

產品優勢:

  • 高特異性:識別GFP,mEGFP,sfGFP,Emerald GFP及最常見的CFP和YFP變體,不與mCherry,mRFP,dsRed,mTagBFP及其衍生物發生交叉反應;

  • 高容量:每μl樹脂結合>4μg GFP;

  • 應用:推薦用于免疫沉淀、質譜。

此外,IBA還提供其他融合標簽免疫沉淀試劑盒:

產品名稱

貨號

規格

GFP Selector

2-9131-002

200μl  Slurry for 10 reactions

2-9131-005

500μl  Slurry  for  25 reactions

2-9131-020

2000μl  Slurry for 100 reactions

GFP Selector Kit

2-9132-008

1  Kit

RFP  Selector

2-9141-002

200μl  Slurry for 10 reactions

2-9141-005

500μl  Slurry  for  25 reactions

2-9141-020

2000μl  Slurry for 100 reactions

RFP Selector Kit

2-9142-008

1  Kit

TagFP  Selector

2-9151-002

200μl  Slurry for 10 reactions

2-9151-005

500μl  Slurry  for  25 reactions

2-9151-020

2000μl  Slurry for 100 reactions

TagFP  Selector Kit

2-9152-008

1  Kit

MBP  Selector

2-9111-002

200μl  Slurry for 10 reactions

2-9111-005

500μl  Slurry  for  25 reactions

2-9111-020

2000μl  Slurry for 100 reactions

MBP  Selector Kit

2-9112-008

1  Kit

GST  Selector

2-9121-002

200μl  Slurry for 10 reactions

2-9121-005

500μl  Slurry  for  25 reactions

2-9121-020

2000μl  Slurry for 100 reactions

GST  Selector Kit

2-9122-008

1  Kit


IBA lifesciences(德國):IBA公司總部位于德國。二十年來,IBA以杰出的專利技術Strep-tag?系統為基礎,發展出完整的產品組合,涵蓋重組蛋白表達、純化與固定以及特定細胞從全血或相關體液中分離的技術。同時,IBA也是全球領先的核酸合成專家,在DNARNA寡核苷酸的合成上已有超過二十年的經驗,能根據客戶的選擇,生產含有特定染料或化學修飾的特殊寡核苷酸。



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