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安徽快三合法不:WB實驗步驟

作者:admin 信息來源:達科為 日期:20130508 打印 字體:  
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安徽快三最新开奖结果查询 www.cvmni.com 1、蛋白樣品的制備:通過有機溶劑或水溶法制備總蛋白

2、做膠:檢測抗原10-30kd, 用15%分離膠;30-100kd, 用10%分離膠;100-200kd,用7.5%分離膠。

3、跑膠:壓縮膠電壓:80V(10mA);分離膠電壓:120V(20mA)當溴酚蘭指示劑到達凝膠底部時,即停止電泳。

4、轉膜:目的蛋白分子80-140kDa時,膠濃度8%,轉移時間為1.5-2小時;目的蛋白分子25-80kDa時,膠濃度10%,轉移時間為1.5小時;目的蛋白分子15-40kDa時,膠濃度12%,轉移時間為0.75小時;目的蛋白分子<20kDa時,膠濃度15%,轉移時間為0.5小時;

5、封閉:脫脂奶粉(5%)、BSA、Western Blot 膜封閉液

6、一抗雜交:5%奶粉或2%BSA稀釋抗體(稱一抗),稀釋比例按抗體說明,室溫孵育1hr,TBST 洗5 mins 3-5 次。

7、二抗雜交:將膜跟5%奶粉或2%BSA稀釋的2 抗一起孵育,室溫1hr。TBST 洗5 mins 3-5 次。

8、底物顯色:

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